體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀
 

　　一、 儀器介紹
 

　　實驗目的：
 

　　本試驗檢測受試物是否引起培養(yǎng)的哺乳動物細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性
 

　　實驗概述：
 

　　在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使培養(yǎng)的哺乳動物細胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理,使細胞停止在中期分裂相,隨后收獲細胞,制片,染色,分析染色體畸變。
 

　　大部分的致突變劑導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發(fā)生。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數(shù)目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數(shù)目畸變。
 

　　應用范圍
 

　　應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域
 

　　二、試驗流程
 

　　1）細胞培養(yǎng)
 

　　選擇合適細胞系，在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期。
 

　　2）受試物處理
 

　　設置多個濃度組(需包括細胞毒性評估，如50%生長抑制濃度)
 

　　陽性對照
 

　　陰性對照(溶劑對照)
 

　　3.）代謝活化系統(tǒng)（S9混合液）
 

　　模擬體內(nèi)代謝，用于檢測需代謝激活的致突變物(如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9)
 

　　4.）采樣時間
 

　　短期處理:1個細胞周期(通常24小時，含或不含S9)
 

　　長期處理:覆蓋多個細胞周期(如48小時)
 

　　5）染色體制備
 

　　秋水仙素(或秋水仙胺)處理:阻斷中期細胞。
 

　　低滲處理(KCI溶液)使細胞膨脹。
 

　　固定(甲醇:冰醋酸=3:1)后滴片，Giemsa染色。
 

　　6）鏡檢分析
 

　　顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。
 

　　三、儀器與試劑
 

　　關(guān)鍵儀器：
 

　　培養(yǎng)箱、生物安全柜、離心機、顯微鏡(配備油鏡和圖像分析系統(tǒng))
 

　　染色體自動掃描儀(可選)
 

　　主要試劑:
 

　　細胞培養(yǎng)基、胎牛血清。
 

　　秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。